Vývoj a optimalizace metody ultra-účinné kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií (U-HPLC–MS/MS) pro stanovení rostlinných alkaloidů

Tropanové a pyrrolizidinové alkaloidy jsou sekundární metabolity přirozeně se vyskytující v několika rostlinných druzích. Jejich výskyt v potravinách představuje potencionální riziko pro spotřebitele. Cílem dané práce bylo vyvinout a optimalizovat analytickou metodu využívající instrumentaci kapalinové chromatografie s nízkorozlišovací tandemovou hmotnostní spektrometrií pro celkem 24 tropanových a 11 pyrrolizidinových alkaloidů. V rámci optimalizace metody byly testovány dva různé extrakční postupy, metoda QuECheRS a směs methanol:voda (60:40, v/v) s 0,4% kyselinou mravenčí. Nejjednodušší optimální metodou se ukázala směs methanol:voda. Dále byly optimalizovány podmínky kapalinové chromatografie a vybrána separační kolona na bázi C-18. Úpravou gradientu složení mobilní fáze došlo ke snížení faktoru chvostování problematických nízkomolekulárních a méně polárních sloučenin a byla dosažena separace dvou isomerů atropinu a littorinu. Pro naladění jednotlivých MS přechodů byly využity standardy alkaloidů a všechny analyty byly identifikovány na základě přechodů mateřských iontů na ionty dceřiné. Vždy byl sledován jeden kvantifikační a dva konfirmační ionty. Dále byla vyvinuta dynamická MRM metoda založená na detekci přechodů v retenčních časech. Trojitý kvadrupól, zvolený jako hmotnostní analyzátor, nám dopomohl k vysoké citlivosti metody a nízkým detekčním limitů požadovaným pro budoucí analýzu reálných vzorků v rámci projektu EFSA, která se danou problematikou nyní zabývá.