Optimalizace metody stanovení 17ß-estradiolu v krevní plasmě

17ß-estradiol je představitelem rozsáhlé skupiny estrogenů - samičích pohlavních hormonů, které mají vliv na vývoj samičích sekundárních znaků a u dospělých zvířat navozují říji. K metabolismu estrogenů dochází hlavně v játrech. Vzniklé metabolity jsou konjugovány na glukuronidy a sulfáty a poté vyloučeny močí nebo přechází do krevního řečiště.
Práce je zaměřena na optimalizaci metody stanovení 17ß estradiolu v krevní plasmě. Metoda se sestává z následujících kroků: (i) enzymová hydrolýza přítomných konjugátů pomocí enzymu glykosidáza/sulfatáza, kdy byly testovány podmínky hydrolýzy (délka hydrolýzy, koncentrace enzymu); (ii) izolace 17ß estradiolu z plazmy pomocí LLE extrakce směsí ethyl acetát:cyklohexan; (iii) vlastní stanovení pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí (HPLC/FLD).
Optimalizovaná metoda bude dále využita ke stanovení fytoestrogenů daidzeinu a genisteinu v krevní plazmě, kdy z důvodu absence standardů glukuronidů jednotlivých analytů není možné metodu optimalizovat přímo.